There has been little attention to Dissolved Organic Matter (DOM) in relation to thecanal water even though a number of studies have applied fluorescence characterizationof DOM in the rivers and lakes, sewage treatment effluents, and industrial waste waters.In this study, the spatial and diurnal characteristics of DOM are described for the Worcester and Birmingham (W&B) canal in England, related to catchment characteristics of rural area. Fluorescence patterns (3D-Excitation Emission Matrix Spectroscopy: EEMs) of DOM show two noticeable peaks at humic and protein-like regions. The range of humic-like intensity was from 163 to 225 a.u. (Avg. 199 a.u.) whereas protein-like intensity was distributed from 282 to 419 a.u. (Avg. 337 a.u.) in the W&B canal. There is a regression of 57% (R2) between humic-like substance and TOC across all sites. The characteristics of canal DOM obtained by 3D-EEMs fluorescence is similar to the rural river water properties, which can be derived from terrestrial input.From the factor analysis, linear relationships (regression rate, R2=0.66) have been shown between peak T2 and nitrate, which indicates the impact of diffuse source from animal farm areas during the summer runoff. For the diurnal change in rural canal, the results of water quality show that the increase of phosphate release from the sediments due to boat activity has been determined as playing a key role in canal water quality. No remarkable differences of DOM fluorescence properties were observed during the investigation. Therefore, it can be predicted that allochthonous DOM of humic substances in this study area (W&B canal) is supplied by runoff from the surrounding watershed and also protein substances can be added to the canal from farm wastes.