A sensitive analytical method has been developed and validated for the determination of 23 polyfluorinated alkyl substances (PFAS) in aqueous matrix using on-line solid phase extraction (SPE) coupled with liquid chromatography (LC)？negative electrospray ionization (ESI) high resolution mass spectrometry (HRMS). On-line SPE allows simultaneous sample clean-up from interfering matrices and lowest concentration minimum reporting levels (LCMRLs) by injecting a small volume of sample into the LC system without compromising chromatographic efficiency and resolution. Source code written in the R Programming language and run in the R software environment to distribute the LCMRL calculator. The method provides MRLs in the range 0.7？31.6 pg/mL of sample extract allowing detection of selected PFAS in water samples. The validated method was applied for analysis of PFAS in reagent water. LCMRL indicates the level of recovery between 50% and 150% of the injected concentration and a 99% confidence level for the data. This method requires a lot of experiments but can be utilized as a way to ensure the accuracy of analytical data.