Catastrophic flooding has been noted to occur with greater frequency following deforestation, but limited observations have been available to test this connection over large spatial scales, with confounding factors complicating attempts to attribute any documented changes in stream flow. Recently, forest fires impacting a region of 25,000 km2 in south-east Australia exhibited severe and rapid loss in forest canopy, where the runoff generation has been carefully observed with minimum anthropogenic influences for more than half a century. This provides a unique opportunity to assess the impact of the forest canopy loss on large-scale fluvial flooding. A state-controlled hypothesis test, with the climate and watershed states controlled to enhance robustness, shows a statistically significant increase in annual maximum flows resulting from the forest loss treatment. The reasoning for this natural experiment is that the forest loss impact on the interception potential of forest canopy, fallen leaves, and root-zone soils in wide region could have a recognizable impact on the fluvial flood.